Стеарил глицирретинат

Физико-химические характериситики

• Внешний вид: белый слегка желтоватый кристаллический порошок с характерным слабовыраженным запахом, практически безвкусный.
• Химическая формула: С₄₈Н₈₂О₄
• Молекулярная масса: 723.18
• Растворим: в этиловом спирте, стеариловом спирте, растительных маслах (оливковом, кунжутном, хлопковом), сквалане, вазелиновом масле, жидком парафине.
• Не растворим: в воде, глицерине и пропиленгликоле.
• Точка плавления: 70–77°С
• Стабильность: Обладает очень высокой стабильностью к нагреванию, свету, влажности и другим имеющим значение факторам.

Свойства

Стеарил глицирретинат получают реакцией этерификации глицирретиновой кислоты, обладающей выраженным противовоспалительным действием, и стеарилового спирта. В отличие от глицирретиновой кислоты, которая практически не растворяется в маслах и жирах, используемых для создания косметических рецептур, стеарил глицирретинат прекрасно растворим в маслах.

Стеарил глицирретинат — продукт, обладающий мощным противовоспалительным действием, не токсичный, хорошо растворимый в маслах или жирах по сравнению с глицирретиновой кислотой. Противовоспалительная активность стеарил глицирретината в два и больше раза выше, чем глицирретиновой кислоты, что было доказано в тестах на животных с использованием эквимолярных концентраций того и другого вещества.

В настоящее время, предлагаемое производное глицирретиновой кислоты широко используется в производстве косметики и лекарственных средств для предотвращения и лечения воспаления и раздражения кожи.

Следует особенно отметить чрезвычайную стабильность стеарил глицирретината к нагреванию, свету, влажности и другим имеющим значение факторам. Тест на старение (более чем три года) ни с чем не смешанного продукта показал, что не произошло почти никаких изменений удельных величин, характеристических величин, внешнего вида и т.д. Образцы мазевой основы, содержащей 0.5% стеарил глицирретината, хранили при комнатной температуре и одновременно при 40°С на протяжении 2 лет и 6 месяцев. Не наблюдалось никаких изменений в обоих образцах.

Безопасность (химическая активность, мутагенность)

Имеющиеся данные не подтверждают физической или химической опасности.

Не реактивно. Продукты опасного разложения отсутствуют.

Мутагенность стеарил глицирретината проверяли методом «Ames test» (тест на канцерогенность по частоте мутаций), используя штаммы Salmonella typhymurium и Escherichia coli, и по результатам тестирования сделали вывод, что стеарил глицирретинат не оказывает мутагенного действия. Острую токсичность проверяли на мышах интраперитонеальным введением, подострую токсичность тестировали на крысах пероральным введением и на кроликах по раздражающему действию на слизистую оболочку глаз, а также на людях посредством раздражающего теста на коже.

Фармакология и действие. Противовоспалительная активность

Метод каррагенинового отека

В тесте проверяли противовоспалительную активность 3-стеароилокси глицирретината, стеарил глицирретината (Производства Maurzen Pharmaceuticals Co., Ltd) и индометацина, как положительного контроля. Мази (W/O эмульсионная основа и O/W эмульсионная основа), содержащие 0.5% или 1.0% тестируемых веществ, наносили на кожу самцов крыс линии Wistar с массой тела приблизительно 130±10г. Раствор каррагенина использовали как индуктор воспаления.

кспериментальная процедура заключалась в следующем: за 1–2 часа до введения каррагенина, 50 мг мази наносили на стопу правой задней лапки крыс, втирая. Далее 0.1 мл 1% раствора каррагенина вводили подкожно в стопу правой задней лапки крыс. Впоследствии через определенные промежутки времени определяли размер отека объемным методом.

Результаты

В W/O эмульсионной основе, коэффициент ингибирования стеарил глицирретината практически равен (немного меньше) коэффициенту ингибирования индометацина, положительного контроля. Что касается 3-стеароилокси глицирретината, то его ингибирующая способность приблизительно в 2 раза ниже, чем у стеарил глицирретината.

В O/W эмульсионной основе заметное ингибирование наблюдалось только в случае 1% стеарил глицирретиновой мази через 3 часа после введения каррагенина.

Даже индометацин, как положительный контроль, ингибировал явно слабее по сравнению с W/O эмульсионной основой.

Полученные результаты показывают необходимость тщательного изучения эмульсионных основ, использованных в эксперименте, т.к. эффективность исследуемых лекарственных средств очень сильно зависела от вида основы-носителя.

И стеарил глицирретинат, и 3-стеароилокси глицирретинат, как и предполагалось, — высоко эффективные противовоспалительные средства для наружного применения в действующих концентрациях.

Влияние на контактный дерматит, вызванный пикрилхлоридом

Методика тестирования

В эксперименте исследовались следующие образцы:

• Раствор этилового спирта (контроль)
• Раствор этилового спирта, содержащего 0.1% стеарил глицирретината
• Раствор этилового спирта, содержащий 0.4% глицирризиновой кислоты

Подопытным животным (мышам) за 1 день до сенсибилизации сбривали шерсть с брюшной области таким образом, чтобы не повредить кожу (площадь: приблизительно 25 х 20 мм). Затем на обезволошенный участок кожи наносили сенсибилизатор — 4% раствор пикрилхлорида в этиловом спирте (100 мкл) по каплям и распределяли равномерно. Шесть дней спустя, измеряли толщину ушных раковин и затем наносили по 20 мкл стимулирующего антигена (1% раствор пикрилхлорида в оливковом масле) на переднюю и заднюю поверхности обеих ушных раковин (первая стимуляция). Через 24 часа снова измеряли толщину ушных раковин. Уровень отека рассчитывали, вычитая из полученной величины толщину до стимуляции.

Отобрав мышей в достаточной мере сенсибилизированных после первой стимуляции, на переднюю и заднюю поверхность правого уха наносили 20 мкл исследуемого образца в течение недели. И еще раз капельно наносили сенсибилизатор (100 мкл) на побритый участок и равномерно распределяли.

После сенсибилизации 20 мкл тестируемого образца наносили на переднюю и заднюю поверхности правой ушной раковины на протяжении недели и измеряли толщину Толщиномером. 20мкл стимулирующего антигена наносили на переднюю и заднюю поверхности правой ушной раковины и измеряли толщину через 24 часа. Уровень отека рассчитывали, вычитая из полученной величины толщину до стимуляции.

Результаты

Полученные данные демонстрируют, что раствор этилового спирта, содержащий 0.1% стеарил глицирретината ингибировал развитие отека приблизительно на 33% по сравнению с контролем. В свою очередь раствор этилового спирта, содержащий 0.4% глицирризиновой кислоты, ингибировал развитие отека всего лишь на 14%.

Исходя из вышесказанного, можно сделать вывод, что стеарил глицирретинат может удовлетворительно подавлять развитие аллергических реакций IV типа.

Потенцирование противовоспалительной активности стеарил глицирретината.

Тестируемые субстанции

• Стеарил глицирретинат (М-2, S-2)
• αБисаболол ((-)-α-Bisabolol nat.: BASF) (M-3, S-3)
• Индометацин (SIGMA)(M-4, S-4)

В качестве образцов использовали липосом-эмульгированный крем (NikkoChemicals Co., Ltd) и базы (М-1, S-1), содержащие выше перечисленные тестируемые субстанции в концентрации 0,1%.

Базы

Методика тестирования

Эксперимент проводили согласно стандартной методике каррагенинового отека

1. Состав групп и количество животных в группе:

2) Приготовление образцов: липосом-эмульгированный крем, содержащий Стеарил глицирретинат (CO-grhetinol), α-Бисаболол и Индометацин в концентрации 0.1% соответственно, производства Nikko Chemicals Co., Ltd.

3) Измерительное оборудование: измеритель объема (Model TK-105, Muromachi Kikai Co., Ltd.) для крыс и мышей.

4) Методика: после того как животные были поделены на группы, их нумеровали и измеряли вес тела. Кроме того, измеряли объем правой задней ступни. За один и два часа до введения воспалительного агента, 50 мг крема тщательно втирали в правую заднюю ступню. Обработанную ступню осторожно покрывали оберточной бумагой.

Воспалительный агент, 1% каррагенина в соляном растворе, (0.1 мл на крысу) вводили подкожно в правую ступню.

Объем правой ступни измеряли через 1, 2, 3 и 4 часа после введения каррагенина.

5) Критерии оценки: cтепень отека рассчитывали, сравнивая измеренные объемы ступни до и после введения каррагенина. Коэффициент ингибирования вычисляли через 3 и 4 часа после каррагениновой инъекции и сравнивали с результатами, полученными в контрольной группе.

6) Оценивали статистическое значение расхождений в степени ингибирования через 3 и 4 часа в исследуемых группах и контроле.

Результаты

Из полученных данных следует, что в случае использования М-типа крема, как базы-носителя, даже индометацин, положительный контроль, ингибировал развитие каррагенинового отека всего лишь на 20%. Подавляющее действие стеарил глицирретината было еще меньше и практически не отличалось от контроля. Собственно сама кремовая база М-типа индуцировала развитие отека на 10–15%.

Если же S-типа крем применялся в качестве базы-носителя, стеарил глицирретинат показывал высокую супрессивную активность — от 30 до 40 %, что даже выше, чем у индометацина (приблизительно 25%). Сама кремовая база S-типа индуцировала развитие отека менее чем на 10%.

Бисаболол не проявил никакой ингибирующей активности ни в одной кремовой базе.

Обсуждение

Результаты эксперимента подтвердили, что O/W крем на основе лецитина обеспечивает проникновение стеарил глицирретината в кожу. В составе такой базы стеарил глицирретинат демонстрирует противовоспалительную активность даже выше, чем у индометацина. Раздражающее действие самого лецитинового крема — слабое и поэтому он идеально подходит как база-носитель для эксперимента. При использовании базы-носителя, приготовленной на основе неионогенного ПАВ, тестируемые вещества были значительно менее эффективными. Бисаболол в тестируемой концентрации был не эффективен.

Подводя итог, можно сказать, что O/W крем на основе лецитина — прекрасная база, чтобы обеспечить достаточную фармакологическую активность небольшого количества стеарил глицирретината.

Заключение

Фармакологическое преимущество O/W крема, приготовленного на основе лецитина.

Для того чтобы обеспечить терапевтический эффект препаратов местного назначения, базовая рецептура должна обладать рядом характеристик, например, способностью удерживать влагу, сродством к коже, совместимостью с активными ингредиентами, хорошими смазывающими свойствами, мелким размером частиц самой эмульсии. Практически все базовые рецептуры имеют свои преимущества и недостатки.

В проведенном эксперименте O/W крем, приготовленного на основе лецитина показал себя необыкновенно эффективным, как база-носитель, обладающая всеми вышеперечисленными свойствами. Кроме того, преимущество лецитина заключается еще и в том, что он является важным компонентом биомембран, обеспечивает доставку активных веществ в кожу, обладает низкой раздражающей способностью.

Клинические исследования

Клинические исследования по изучению действия Cтеарил Глицирретината на повреждение кожи, вызванное В-ультрафиолетовыми лучами.

Поскольку предполагалось, что противовоспалительное действие стеарил глицирретината может предотвратить пост-воспалительную пигментацию, то в данном эксперименте оценивали эффективность стеарил глицирретината против эритемы, вызванной ультрафиолетовым облучением.

Методика тестирования

Группа, в которой проводилось исследование, состояла из 10 взрослых мужчин в возрасте от 26 до 47 лет. У всех участников эксперимента отсутствовали какие-либо симптомы экземы или воспаления кожи. В конце эксперимента кожные покровы 10 мужчин проверяли и оценивали результат.

Согласие пациентов: перед началом исследования было получено письменное согласие участников, которым подробно объяснили следующее:

• Объекты и методики изучения;
• Предполагаемый результат и возможные побочные эффекты;
• Право всех субъектов свободно принимать решение об участии в эксперименте;
• Право всех субъектов отозвать свое согласие об участии в эксперименте в любое время;
• Свободу всех субъектов от каких-либо взысканий или неприятных последствий в случае отказа от участия в эксперименте или в случае отзыва согласия;
• Гарантию защиты прав субъектов, включая медицинскую ответственность за возникновение побочных эффектов.

Рецептура образца для тестирования

Образец крема для данного исследования был изготовлен Nihon Surfactant Kogyo Co., Ltd.

Определение интенсивности ультрафиолетового излучения

Для тестирования средняя часть левого плеча была условно поделена на три секции. В целом, считалось, что в обычной жизни эта часть руки мало подвержена воздействию света.

Чтобы подобрать дозу облучения достаточную для возникновения эритемы, определяли индивидуальную чувствительность кожи участников эксперимента к ультрафиолету. В качестве источника ультрафиолета применяли лампу UVB:TRANSILLUMINETOR UV-302 (λmax: 310 нм). Интенсивность облучения измеряли с помощью цифрового измерителя интенсивности ультрафиолетового излучения (UVX-31:310 nm, Ultra-Violet Products, Ltd). Для эксперимента применяли интенсивность 800 μW/cm?.

Методика и время нанесения

Приблизительно 10–15 г тестируемой субстанции наносили на поверхность кожи, выбранную для облучения, дважды в день, утром (около 9.00) и вечером (около 17.00). Таким образом поступали пять раз в неделю на протяжении двух недель до начала эксперимента, т.е. до облучения. Кожу перед облучением тщательно очищали теплой водой.

Результаты наблюдений за кожей записывали до начала эксперимента и через один, два и три дня после облучения ультрафиолетом.

Наблюдение за кожей

1. До эксперимента
   Учитывалась любая гиперчувствительность к применяемым препаратам или свету, а также наличие и степень повреждения кожи.

2. Измерения в процессе эксперимента
   Отмечали наличие и степень повреждения участков кожи, на которые наносили тестируемые вещества. Выраженность эритемы оценивали с помощью колориметра в соответствии со стандартным значением а*.

С момента начала эксперимента исследуемые области фотографировали каждые раз, когда оценивали состояние кожи. Степень улучшения состояния кожи оценивали с помощью колориметра на дату каждого планового наблюдения.

Результаты

Коэффициент предотвращения UVB-индуцированной эритемы.

Выводы

Использование 0.1% Стеарил глицирретината на протяжении двух недель до UVB-облучения предотвращало развитие эритемы.

0.1% стеарил глицирретината подавляет образование эритемы более чем на 33% по сравнению с плацебо, в то время как 0.3% бисаболола в составе крема способствовало развитию воспаления.

Проведенный эксперимент подтверждает эффективность стеарил глицирретината как профилактического ингредиента воспаления.

Тесты на безопасность

Кожная аллергическая проба (пач-тест)

Тестируемые рецептуры

• А: Эмульсия на основе вазелина, содержащая 2% стеарил глицирретината
• В: Эмульсия на основе вазелина, содержащая 2% стеарил глицирретината
• С: Эмульсия на основе вазелина (контроль)

В качестве субъектов для данного исследования были выбраны 18 здоровых человек и 14 пациентов с кожными заболеваниями (4 с острой экземой, 5 с хронической экземой и 5 с дерматитом, появившемся в результате медикаментозного лечения трихофити). Ни у одного из выбранных участников эксперимента не было заболеваний кожи предплечья.

Методики

Тестируемые рецептуры равномерно распределяли на куске марли и наносили на кожу сгибательной поверхности предплечья. Через 24 часа наблюдали воспалительную реакцию.

Метод оценки — cтепень воспалительной реакции оценивали согласно следующим критериям

• Отсутствие эритемы — отрицательная реакция (–)
• Наличие эритемы  — положительная реакция (+)

Результаты

Пач-тест у здоровых людей: Эритема не наблюдалась ни на одной кожной поверхности, обработанной тестируемыми рецептурами. Т.е. все рецептуры показали отрицательную реакцию у всех субъектов исследования.

Пач-тест у пациентов с заболеваниями кожи: Эритема не наблюдалась ни на одной кожной поверхности, обработанной тестируемыми рецептурами. Т.е. все рецептуры показали отрицательную реакцию у всех субъектов исследования.

Выводы

Кожные аллергические пробы эмульсии на основе вазелина, содержащей 2% стеарил глицирретината, и эмульсии на основе вазелина, содержащей 2% стеароил глицирретината, проводились среди 32 субъектов (18 здоровых человек и 14 пациентов с заболеваниями кожи); эмульсию на основе вазелина использовали как контроль. Все исследуемые рецептуры показали отрицательную реакцию у всех субъектов эксперимента, т.е. ни одна рецептура не вызвала раздражения кожи.

Острая токсичность

1. Острая токсичность (на мышах)
   LD50 > 6000 мг/кг

2. Острая токсичность (на крысах)
   LD50 > 4000 мг/кг